Olink 超微量高靈敏靶向蛋白組分析儀

一、儀器主要用途

Signature Q100可以直接對不同基質（包括血漿、血清、腦脊液、淚液、肺泡灌洗液、尿液、外泌體裂解液和細胞提取物等）中多種低豐度蛋白分子進行超高靈敏度檢測。僅需要1ul上樣量即可同時檢測92種蛋白因子，一個樣品中可檢測多達上千種蛋白，靈敏度可以達到fg/ml的水平，動態范圍可以達到10個log值。這些功能蛋白涉及炎癥、免疫應答、心血管、腫瘤、神經、代謝、器官損傷、發育和細胞調節等相關功能蛋白。

Olink技術認可度高，人類血漿蛋白組官網推薦，美國癌癥登月計劃臨床檢測技術官方推薦，UKB和deCODE大量用于人群隊列研究，近幾年發表文獻超過1000篇，其中包括高分雜志LANCET、NEJM、Cell、Nature、Science等，涉及心血管、神經、腫瘤、感染性疾病、免疫炎癥、內分泌、生殖、眼科、精神類等各種疾病研究領域的應用。該儀器型號Signature Q100，產地瑞典，品牌Olink Proteomics，代理商是斑馬魚（北京）科技有限公司。

二、檢測原理

Signature Q100超微量高靈敏靶向蛋白組分析儀采用PEA（Proximity Extension Assay，鄰位延伸技術）的專利技術，這是一種靶向蛋白檢測方法，它結合了基于雙抗體夾心的免疫分析和“DNA 條形碼”技術，它的原理非常巧妙（如下圖所示）：

首先針對目標蛋白設計一對抗體，讓每種抗體上連接互補的獨特的DNA寡核苷酸探針；這對抗體特異性地與目標蛋白結合后，抗體對上的DNA寡核苷酸鏈雜交，創建一個雙鏈DNA"條形碼"，該條形碼對于靶蛋白來說是唯.一的，并且在數量上與靶蛋白的初始濃度成正比。雜交和延伸后立即進行PCR擴增信號放大，最后再通過SignatureQ100微流控技術進行檢測。通過這一過程，蛋白濃度信號會轉換成核酸信號，從而實現不同豐度蛋白的檢測。

 
三、實驗流程(以血漿檢測為例）：

1、免疫孵育：將1ul血漿加入反應溶液中，再加入92對偶聯寡核苷酸鏈的抗體，在4 ℃進行免疫孵育反應；

2、延伸及預擴增：結合在同一蛋白上鄰近的一對抗體的寡核苷酸單鏈會形成互補配對，并在DNA聚合酶等的作用下延伸成一條完整“DNA”條形碼，并進行PCR擴增；

3、信號檢測：將擴增后的樣品加入到Signature Q100設備的微流控芯片中，機器自動進行Loading、定量檢測以及信號讀取。 

四、Signature Q100性能優勢：

1、超高靈敏度：目標蛋白檢測靈敏度（低至fg/ml水平），可以在組學水平上檢測疾病相關的成百上千種低豐度蛋白（尤其是血漿、血清、房水、腦脊液、胸水、尿液等各種體液樣本中的低豐度蛋白）；

2、樣本微量：僅需要1ul上樣量可同時檢測多達92種非常低濃度的蛋白因子，可檢測微量樣品，節約珍貴樣本；

3、多重能力：一個樣品中可檢測多達上千種功能蛋白，達到組學研究水平；

4、寬動態范圍：檢測范圍橫跨10個log值，可以同時兼顧不同豐度的蛋白；

5、高重復性：引入成熟“DNA”條形碼技術及定量作為檢測手段，重復性非常好，數據質量高重現性好，適合疾病研究、多組學聯合應用以及大隊列大數據分析要求。質控設計和充分驗證，所有數據具備組學水平最高

6、高特異性：基于PEA專利技術的獨特性，克服了多重免疫檢測中公認存在的抗體交叉反應及信號串擾問題（如下圖A所示），而PEA是對目標蛋白的雙抗體識別和高保真DNA雜交檢測的雙重要求，所以不會檢測出任何非特異性抗體結合的信號（如下圖B所示）：

五、Olink 與質譜檢測技術比較：

1、Olink檢測的靈敏度更高，能檢測到fg級別的蛋白：

質譜目前檢測的多為血漿血清里的偏高豐度的蛋白，實際上那些中低豐度的蛋白也有非常重要的作用，這部分蛋白olink可以非常好的檢測到，如下圖所示：

Stefanie M. Hauck團隊的在“Systems biology in cardiovascular disease: a multiomics approach”文中寫道：高豐度蛋白質的存在，如血清白蛋白或免疫球蛋白，在高度復雜的血漿基質中直接影響質譜檢測的靈敏度，使得低豐度蛋白質如細胞因子沒辦法好的被檢測出來。而鄰位延伸技術(Olink)相對于質譜分析增加了蛋白質組覆蓋的深度。

2、Olink PEA在“靶向檢出蛋白數”、“重現性”方面綜合顯著優于DDA、DIA：

質譜在多樣本檢測時形成的蛋白與樣本的表達矩陣中存在比較多的缺失值。引用參考文獻中數據：基于KORA隊列中的173份血漿樣本進行MS（DIA、DDA）與Olink PEA檢測（8個Panel）數據比較，結果如下：

六、Olink技術 vs 其它蛋白檢測技術

科學家在瑞典斯德哥爾摩烏普薩拉地區的不同實驗室對多個技術平臺進行了頭對頭比較，Olink平臺的檢測指標通量、靈敏度、樣品量、動態范圍、重復性等方面都具有領先優勢，如果感興趣，可以和斑馬魚公司聯系。

技術培訓和支持：斑馬魚（北京）科技有限公司是Olink代理商，負責儀器和試劑的推廣銷售，具備豐富的細胞因子和蛋白標志物檢測方面經驗，可為用戶提供樣本制備、儀器操作、數據分析等一整套解決方案。在購買儀器后，將安排有資質的工程師進行現場安裝和培訓。在培訓完成后，客戶還將獲得全方位支持，包括遠程技術支持（Technical Support）、現場應用科學家（FAS）、現場服務工程師（FSE）和生物信息學應用（Applied Bioinformatics）團隊，覆蓋實驗工作流程、試劑耗材、儀器和軟件的各個方面。

七、Olink在轉化醫學和臨床研究中的應用

1、生物樣本庫進行人群規模隊列血液蛋白組檢測
應用案例：英國生物樣本庫和冰島deCODE中心均采用olink蛋白組平臺進行世.界級大規模人群隊列的血液蛋白組檢測；
2、疾病早篩及伴隨診斷蛋白標志物的開發（IVD及LDT開發）
應用案例：Octave公司的多發性硬化癥伴隨診斷試劑盒開發、香港葉玉如院士阿爾茲海默癥早診標志物開發、加拿大卵巢癌診斷標志物的開發；
3、藥物靶點發現驗證
應用案例：Scallop聯盟采用基因組數據加olink蛋白組數據進行孟德爾隨計劃分析，做pQTL尋找因果關系；
4、臨床預后療效預測，病人分層&伴隨診斷標志物開發
應用案例：美國癌癥登月計劃將Olink公司的Immuno-Oncology panel指定為腫瘤免疫治療中第.一梯隊的檢測方法，主要用于免疫療法的安全性及有效性評估；
5、免疫類組學研究
應用案例：近期新冠炎癥反應相關文章，自身免疫病，多組學聯用研究免疫系統，早產兒、新生兒免疫系統發育評估等等；
6、分泌組學研究（主要用于細胞培養上清中蛋白因子檢測）：
應用案例：無創胚胎評估技術、細胞系藥物實驗等
7、新技術應用開發
應用案例：CTC細胞及稀有細胞的轉錄&蛋白質組研究，外泌體的蛋白質組研究，生物標志物發現等。

八、技術參數

1、功能用途：可以對細胞因子及蛋白標志物進行超微量、低豐度、超高靈敏度的多重檢測；廣泛應用于基礎科學、轉化醫學、藥物開發、臨床試驗、生物樣本庫和人群大隊列研究；也可進行實驗方案開發和優化，有利于生理狀態評估、藥物安全性有效性評估、診斷及療效預測標志物開發，適合科研創新和開創性研究；
2、樣品類型：血漿、血清、腦脊液、淚液、肺泡灌洗液、尿液、外泌體裂解液和細胞提取物等；
3、儀器為一體化設計，觸屏操作，采用微流控技術自動構建納升級反應體系；
4、最小上樣量：≤1ul血漿或其它體液樣本；
5、多重檢測：1ul樣本可同時檢測≥92種細胞因子；
6、靈敏度：fg/ml，發現不易檢測的蛋白標志物；
7、動態范圍：10 log（fg/ml-ug/ml），可同時在一個體系里檢測低表達和高表達的蛋白靶標；
8、可檢測指標數：每個樣本可檢測蛋白指標數≥1000個；
9、高重復性：CV值小于10%；
10、高特異性：基于PEA技術，克服了多重免疫檢測中抗體交叉反應及信號串擾問題；
11、溫控范圍：4–99 oC；
12、抗體孵育：待檢測蛋白的抗體與樣本在同一個孔中完成均相孵育，無需洗板和包被；
13、絕.對定量：可以進行絕.對定量；
14、發表文獻≥1000篇；

九、斑馬魚（北京）科技有限公司，是Olink的經銷商，負責超微量高靈敏靶向蛋白組分析儀的推廣銷售和技術支持，為您提供儀器的參數、價格、選型、技術原理等信息，更多相關信息可留言或來電咨詢。

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