Dr.賽流式小課堂 | 流式補(bǔ)償救星：揭秘補(bǔ)償微球的超能力！

來源：賽默飛世爾科技生命科學(xué)產(chǎn)品      分類：操作使用 2025-02-19 17:53:40 34閱讀次數(shù)

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什么是補(bǔ)償微球？

在進(jìn)行傳統(tǒng)流式多色分析時(shí)，由于熒光染料的發(fā)射光譜重疊，不同通道的檢測器可能會(huì)檢測到來自其他染料的熒光信號(hào)，造成熒光溢漏（Fluorescence Spillover），通常我們會(huì)使用樣品單染管來調(diào)節(jié)補(bǔ)償校正信號(hào)。但實(shí)際操作中，我們可能會(huì)遇到用樣本標(biāo)記的單染管表達(dá)豐度較弱，甚至沒有陽性，這個(gè)時(shí)候補(bǔ)償很難調(diào)節(jié)，我們就需要使用到補(bǔ)償微球。

圖1：熒光補(bǔ)償是通過數(shù)學(xué)算法對(duì)流式細(xì)胞數(shù)據(jù)進(jìn)行校正來去除光譜的重疊。

補(bǔ)償微球含有兩種大小均勻的聚苯乙烯微球，一種是陽性補(bǔ)償微球（positive beads）能結(jié)合熒光偶聯(lián)抗體/染料，另一種是陰性補(bǔ)償微球（negative beads）不能結(jié)合熒光偶聯(lián)抗體/染料，當(dāng)兩種微球混合后能夠產(chǎn)生模擬樣品細(xì)胞群的陽性和陰性熒光群體。

圖2：補(bǔ)償微球染色示意圖

例如圖片3所示，當(dāng)使用小鼠原代脾臟細(xì)胞制備Ki-67單染管時(shí)，陰性和陽性細(xì)胞群連在一起，沒有明顯的雙峰分布，無法圈出陽性群做補(bǔ)償調(diào)節(jié)；而當(dāng)使用Invitrogen UltraComp eBeads Plus 補(bǔ)償微球制備Ki-67單染管時(shí)，陰性和陽性群分群清晰（50%陽性和50%陰性） ，易于圈選陽性群調(diào)節(jié)補(bǔ)償。

圖3：Ki-67 antibody staining on cells (上圖)；

Ki-67 antibody staining on UltraComp eBeads Plus (下圖)

選擇細(xì)胞樣本or補(bǔ)償微球？

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流式熒光補(bǔ)償微球產(chǎn)品選擇指南

Invitrogen抗體補(bǔ)償微球產(chǎn)品

（點(diǎn)擊查看大圖）

常見Question & Answer

問

如何選擇合適的抗體補(bǔ)償微球？

答

選擇合適的抗體補(bǔ)償微球時(shí)，請(qǐng)注意以下幾點(diǎn)：

1. 確定流式熒光抗體的宿主和亞型，根據(jù)補(bǔ)償微球的抗體反應(yīng)性選擇；

2. 了解補(bǔ)償微球的激光兼容性，根據(jù)流式儀器的配置選擇合適的補(bǔ)償微球。

問

能否使用抗體補(bǔ)償微球染 LIVE/DEAD 可固定死活染料做補(bǔ)償單染管呢？

答

不能。對(duì)于 LIVE/DEAD 可固定死活染料這類胺反應(yīng)性染色劑，建議您使用我司的 ArC 胺反應(yīng)性補(bǔ)償珠試劑盒（貨號(hào) A10346 和 A10628）進(jìn)行補(bǔ)償對(duì)照。試劑盒包括兩種特別修飾的聚苯乙烯微球：

• ArC 反應(yīng)性微珠（組分 A）：可結(jié)合任何胺反應(yīng)性染料，提供陽性信號(hào)。

• ArC 陰性微珠（組分 B）：無反應(yīng)性，提供陰性信號(hào)。

詳見如下產(chǎn)品表：

問

我待檢測的細(xì)胞樣本表達(dá)了熒光蛋白，想要設(shè)置補(bǔ)償單染管，可以選擇什么補(bǔ)償微球產(chǎn)品呢？

答

在使用熒光蛋白表達(dá)樣品時(shí)，建議選擇 BrightComp eBeads? 補(bǔ)償微珠設(shè)置補(bǔ)償單染管。該試劑盒包含陰性微球和陽性微球，其中陽性微球經(jīng)過染色，在 GFP、mCherry、RFP、CFP 和 YFP 上都表現(xiàn)出三種強(qiáng)度的熒光特征。這些微球能夠輕松完成補(bǔ)償調(diào)節(jié)，確保實(shí)驗(yàn)結(jié)果的準(zhǔn)確性。詳見如下產(chǎn)品表：

問

補(bǔ)償微球的染色步驟要和細(xì)胞樣本染色步驟一致嗎？

答

用補(bǔ)償微球做的單色管需要與細(xì)胞經(jīng)歷相同的染色步驟，包括固定和破膜試劑的處理，以確保微球標(biāo)記的熒光素與細(xì)胞標(biāo)記的熒光素光譜一致。

問

我使用補(bǔ)償微球制備的單染管流式上機(jī)后，為什么在FSC/SSC中出現(xiàn)了多個(gè)細(xì)胞群？

答

由于材質(zhì)原因，補(bǔ)償微球易聚集，F(xiàn)SC/SSC出現(xiàn)多群可能是由于微球聚集造成的，因此使用微球之前要充分渦旋（是否能渦旋請(qǐng)參考產(chǎn)品說明書），且注意微球儲(chǔ)存過程不能冷凍。

流式細(xì)胞術(shù)是重要的細(xì)胞分析方法學(xué)，賽默飛世爾科技的Gibco、Invitrogen和Thermo Scientific產(chǎn)品品牌可提供從流式儀器、抗體試劑到豐富資源的流式整體解決方案。其中Invitrogen eBioscience陪伴著每一代流式科學(xué)家和技術(shù)人員獲得成果、共同成長，這些年來我們一起見證以Anti-FoxP3為代表的流式抗體深受喜愛、更多種類的流式熒光染料欣然上市以及賽默飛科學(xué)家們的十年如一日技術(shù)陪伴，現(xiàn)在有著更豐富的產(chǎn)品和工具，滿足高校研究院、生物技術(shù)公司、藥企等從早期基礎(chǔ)研究到臨床轉(zhuǎn)化和生產(chǎn)等不同階段的需求，加速生命科學(xué)行業(yè)的進(jìn)程發(fā)展。

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