全部評(píng)論(1條)
-
- 昝忙肌 2016-01-14 00:00:00
- ?、倏焖倮鋬?,用致冷劑(如液氮、液體氟利昂、液體丙烷等)或其他方法使生物材料急劇冷凍,使組織和細(xì)胞中的水只能凍結(jié)成體積極小的冰晶甚至無(wú)定形的冰──玻璃態(tài)。這樣,細(xì)胞結(jié)構(gòu)不致被冰晶破壞,生物大分子可保持天然構(gòu)型,酶及抗原等能保存其生物活性,可溶性化學(xué)成分(如小分子有機(jī)物和無(wú)機(jī)離子)也不致流失或移位。用冷凍的組織塊,可進(jìn)行切片、冷凍斷裂、冷凍干燥和冷凍置換等處理。用此法固定的樣品既可提供組織、細(xì)胞結(jié)構(gòu)的形態(tài)學(xué)信息,又可提供相關(guān)的細(xì)胞化學(xué)信息。②化學(xué)固定,固定劑有凝聚型和非凝聚型兩種,前者如光學(xué)顯微術(shù)中常用的乙醇、二等,此法常使大多數(shù)蛋白質(zhì)凝聚成固體,結(jié)構(gòu)發(fā)生重大變化,常導(dǎo)致細(xì)胞的細(xì)微結(jié)構(gòu)出現(xiàn)畸變。非凝聚型固定劑包括戊二醛、和甲醛等醛類(lèi)固定劑和,四氧化鉬等,適用于電子顯微。它們對(duì)蛋白質(zhì)有較強(qiáng)的交聯(lián)作用,可以穩(wěn)定大部分蛋白質(zhì)而不使之凝聚,避免了過(guò)分的結(jié)構(gòu)畸變。它們與細(xì)胞蛋白質(zhì)有較強(qiáng)的化學(xué)親和力,固定處理后,固定劑成為被固定的蛋白質(zhì)的一部分。如用含有重金屬元素的固定劑(也是良好的電子染色劑)進(jìn)行固定,因?yàn)殇~與蛋白質(zhì)結(jié)合,增強(qiáng)了散射電子的能力,提高了細(xì)胞結(jié)構(gòu)的反差。采用一種以上固定劑的多重固定方法,如采用戊二醛和的雙固定法,能較有效地減少細(xì)胞成分的損失。此外,固定劑溶液的濃度、pH及所用的緩沖劑類(lèi)型、滲透壓、固定時(shí)間和溫度等對(duì)固定效果都有不同程度的影響。 固定操作方法通常是先將材料切成 1立方毫米左右小塊,浸在固定液中,保持一定溫度(通常為4℃),進(jìn)行一定時(shí)間的固定反應(yīng)。取材操作要以盡可能快的速度進(jìn)行,以減少組織自溶作用造成的結(jié)構(gòu)破壞。對(duì)某些難以固定的特殊組織,如腦、脊髓等,Z好使用血管灌注方法固定,即通過(guò)血管向組織內(nèi)灌注固定液,使固定液在組織發(fā)生缺氧癥或解剖造成損傷之前,快速而均勻地滲透到組織的所有部分。灌注固定的效果比浸沒(méi)固定好得多。 脫水化學(xué)固定后,將材料浸于乙醇、丙酮等有機(jī)溶劑中以除去組織的游離水。為避免組織收縮,所用溶劑需從低濃度逐步提高到純有機(jī)溶劑,逐級(jí)脫水。 浸透脫水之后,用適當(dāng)?shù)臉?shù)脂單體與硬化劑的混合物即包埋劑,逐步替換組織塊中的脫水劑,直至樹(shù)脂均勻地浸透到細(xì)胞結(jié)構(gòu)的一切空隙中。 包埋浸透之后,將組織塊放于模具中,注入樹(shù)脂單體與硬化劑等混合物,通過(guò)加熱等方法使樹(shù)脂聚合成堅(jiān)硬的固體。用作包埋劑的樹(shù)脂有甲基丙烯酸酯、聚酯和環(huán)氧樹(shù)脂等。Z廣泛使用的是某些類(lèi)型的環(huán)氧樹(shù)脂,如618樹(shù)脂、Epon812、Araldite和 Spurr等商品樹(shù)脂。它們具有良好的維持樣品特性、低收縮率和較強(qiáng)的耐電子轟擊能力等優(yōu)點(diǎn)。 切片制備超薄切片要使用特制超薄切片機(jī)(大多是根據(jù)精密機(jī)械推進(jìn)或金屬熱膨脹推進(jìn)原理制成)和特殊的切片刀(用斷裂的玻璃板制成的玻璃刀或用天然金剛石研磨而成的金剛石刀)。先將樹(shù)脂包埋塊中含有生物材料的部分,用刀片在立體顯微鏡下修整成細(xì)小的金字塔形,再用超薄切片機(jī)切成厚度適中(500埃左右)的超薄片,切片應(yīng)依次相互聯(lián)接形成切片帶。切片帶漂浮于裝在切片機(jī)上的水槽中的水面上。 通過(guò)裝置在切片機(jī)上的解剖顯微鏡,監(jiān)控切片過(guò)程。用熒光燈照射水面上的切片,并根據(jù)由此產(chǎn)生的干涉光顏色來(lái)判斷切片的實(shí)際厚度(見(jiàn)表)。 切片通常用敷有薄的支持膜的特制金屬載網(wǎng),從水面上撈取??焖倮鋬龉潭ǖ纳锊牧?,可用冷凍超薄切片裝置制成切片。用醛類(lèi)或冷凍方法固定的組織,可通過(guò)超薄切片術(shù)與生物化學(xué)技術(shù)、免疫技術(shù)等結(jié)合使用,進(jìn)行超微結(jié)構(gòu)水平上的蛋白質(zhì)、核酸、酶及抗原等生物活性物質(zhì)的定位甚至定量研究。這就是電鏡細(xì)胞化學(xué)技術(shù)(見(jiàn)細(xì)胞化學(xué))和電鏡免疫細(xì)胞化學(xué)技術(shù)。 染色電子顯微鏡主要是依賴散射電子成像,為了增強(qiáng)細(xì)胞結(jié)構(gòu)的電子反差,需要對(duì)切片進(jìn)行染色。染色是依據(jù)各種細(xì)胞結(jié)構(gòu)與染色劑(重金屬鹽)結(jié)合的選擇性,而形成不同的對(duì)電子散射能力,從而產(chǎn)生借以區(qū)別各種結(jié)構(gòu)的反差。電子染色方法分塊染色和切片染色兩種:①塊染色法,在脫水劑中加入染色劑,在脫水過(guò)程中對(duì)組織塊進(jìn)行電子染色。②切片染色法,Z常用,即將載有切片的金屬載網(wǎng)漂浮或浸沒(méi)在染色液中染色。也可使用有微處理機(jī)控制的染色機(jī)進(jìn)行自動(dòng)化染色。一般切片染色所使用的染色劑為金屬鈾鹽和鉛鹽的雙重染色。為顯示某種特殊結(jié)構(gòu),則可采用與該結(jié)構(gòu)有特異性結(jié)合的選擇性染色劑。 冷凍置換法用有機(jī)溶劑(如丙酮、等)在低溫條件下(通常,-80~-90℃),緩慢地置換冷凍固定的小塊組織中的冰(“惰性脫水”),這樣可減少常規(guī)方法脫水過(guò)程中有機(jī)溶劑對(duì)組織中化學(xué)組分的抽取。然后再按常規(guī)方法進(jìn)行樹(shù)脂包埋、超薄切片和染色等。用冷凍置換法,可以很好地保存快速變化過(guò)程中物質(zhì)的狀態(tài)和非常脆弱的超微結(jié)構(gòu)以及細(xì)胞內(nèi)某些化學(xué)組分。 電鏡放射自顯影技術(shù)用超薄切片術(shù)與放射性同位素標(biāo)記技術(shù)相結(jié)合的電鏡放射自顯影術(shù)(見(jiàn)同位素技術(shù))可獲得同位素標(biāo)記的化合物在組織細(xì)胞內(nèi)存在部位,以及在代謝過(guò)程中物質(zhì)的合成、分解、轉(zhuǎn)運(yùn)及分泌的信息。 負(fù)染色和投影技術(shù) 研究分散的顆粒狀生物材料,為增強(qiáng)其反差,常采用的方法。 負(fù)染色研究以蛋白質(zhì)為主要成分的顆粒狀材料的Z常用方法。以某些在電子束轟擊下穩(wěn)定而又不與蛋白質(zhì)相結(jié)合的重金屬鹽類(lèi)作為負(fù)染色劑,使之在支持膜上將顆粒材料包圍,形成具有高電子散射能力的背景,襯托出低電子散射能力的顆粒的形態(tài)細(xì)節(jié)。其所成的電子顯微像的反差與常規(guī)電子染色相反,即暗的背景和亮的顆粒形態(tài)的所謂陰性反差。負(fù)染色方法簡(jiǎn)便,所獲得的顆粒的電子顯微圖像反差強(qiáng),分辨率也高于超薄切片,可廣泛用于研究蛋白質(zhì)分子、細(xì)菌鞭毛、蛋白質(zhì)結(jié)晶,以及生物膜及分離的細(xì)胞的細(xì)微結(jié)構(gòu),特別適用于蛋白質(zhì)大分子及病毒顆粒結(jié)構(gòu)的三維重建研究。常用的負(fù)染色劑有醋酸鈾、磷鎢酸鈉或磷鎢酸鉀、 硅鎢酸、 銅酸銨及甲酸鈾等。用液滴法或噴霧法將顆粒材料的懸液加在載網(wǎng)的支持膜上,然后滴加負(fù)染色劑溶液。或?qū)㈩w粒的懸液與負(fù)染色劑按一定濃度混合滴加或噴撒到支持膜上,吸去多余液體,待干燥后,即可用電鏡觀察。樣品顆粒在支持膜上的均勻分散是成功的關(guān)鍵之一。染色劑溶液的pH則是成功的另一關(guān)鍵。一般染色劑的pH應(yīng)在中性偏酸范圍(pH 5~7),但對(duì)不同種類(lèi)的顆粒材料和染色劑,Z適pH也不盡相同。 投影 在真空蒸發(fā)器的高真空腔中,加熱某些金屬至熔化后,金屬以細(xì)小顆粒沿直線方向蒸發(fā)出來(lái)。當(dāng)金屬微粒以一定入射角噴鍍?cè)谳d有顆粒材料的載網(wǎng)支持膜表面上時(shí),顆粒向蒸發(fā)源的一面即被鍍上一層金屬薄膜,而背蒸發(fā)源的一面及附近區(qū)域形成無(wú)金屬沉積的“陰影”,并且由于各部位散射電子能力存在著差別,這樣就能構(gòu)成具有強(qiáng)烈反差和立體感的電子顯微圖像。常用于投影的蒸發(fā)材料,有金、 鉻、 鉑、鈀以及鉑-銥、鉑-鈀、鉑-碳等金屬或合金。此外,還可利用電子槍投影裝置使鎢、鉭等高熔點(diǎn)金屬以極微細(xì)顆粒蒸發(fā),從而獲得高分辨率投影。 蛋白質(zhì)展膜技術(shù)用電子顯微鏡研究核酸分子常用的方法。某些堿性球蛋白,如細(xì)胞色素c,可以在低濃度鹽溶液或蒸餾水表面展成單分子層,在展開(kāi)過(guò)程中,能為蛋白質(zhì)的堿性氨基酸側(cè)鏈基團(tuán)所吸附的、帶負(fù)電荷的核酸分子同時(shí)展開(kāi)成完整的線狀分子。然后,用帶有支持膜(有機(jī)膜或碳膜)的載網(wǎng)撈起這些蛋白質(zhì)──核酸展膜,并用染色或金屬投影法提高核酸分子的反差,可在電鏡下直接觀察核酸分子的形態(tài)、DNA的雙螺旋結(jié)構(gòu),并可通過(guò)分子長(zhǎng)度的測(cè)量來(lái)計(jì)算核酸分子量。 冷凍斷裂和冰凍蝕刻技術(shù)研究細(xì)胞超微結(jié)構(gòu),特別是生物膜結(jié)構(gòu)的一種獨(dú)特的樣品制備技術(shù)。利用快速冷凍方法固定的生物組織塊具有剛性和脆性。在對(duì)其施加外力后,組織即在結(jié)構(gòu)上結(jié)合Z薄弱的部位發(fā)生“脆性斷裂”,這就是“冷凍斷裂”。對(duì)于生物膜,斷裂沿膜內(nèi)部疏水區(qū)發(fā)生,從而暴露出膜內(nèi)部結(jié)構(gòu)。利用投影和復(fù)型技術(shù),制備斷裂面的復(fù)型,然后將組織腐蝕掉,并用載網(wǎng)撈起復(fù)型膜,就可用電鏡來(lái)研究組織斷裂表面所顯示的細(xì)胞的或生物膜內(nèi)部超微結(jié)構(gòu)。在高于 10毫米汞柱真空度和-100℃溫度下,冷凍組織的斷裂表面上的冰升華為水蒸汽,而使原表面高度下降,即謂之“冰凍蝕刻”。由于組織各部分結(jié)構(gòu)的含水量不同,冰的升華造成各部分結(jié)構(gòu)的表面高度下降程度有差異,因此冰凍蝕刻的斷裂表面的投影、復(fù)型所顯示的斷裂表面形態(tài)具有很強(qiáng)的立體感。冷凍斷裂和冰凍蝕刻技術(shù),為細(xì)胞超微結(jié)構(gòu),特別是關(guān)于細(xì)胞聯(lián)接、細(xì)胞融合、細(xì)胞分化以及生物膜的通透性的研究提供了許多重要信息。也為流行的生物膜結(jié)構(gòu)模型,即“流動(dòng)鑲嵌模型”的研究提供了有利的證據(jù)。
-
贊(19)
回復(fù)(0)
熱門(mén)問(wèn)答
- 透射電子顯微鏡的樣品制作要求有哪些
- 透射電子顯微鏡中有哪些主要光闌
- 透射電子顯微鏡的觀察記錄
- 掃描透射電子顯微鏡的優(yōu)點(diǎn)
- 透射電子顯微鏡怎么調(diào)節(jié)
透射電子顯微鏡怎么調(diào)節(jié):全面解析與操作步驟
透射電子顯微鏡(Transmission Electron Microscope,簡(jiǎn)稱TEM)作為一種高分辨率的成像工具,廣泛應(yīng)用于生物學(xué)、材料科學(xué)等領(lǐng)域,能夠觀察到細(xì)胞內(nèi)部結(jié)構(gòu)及微觀材料的原子級(jí)別細(xì)節(jié)。要發(fā)揮TEM的大效能,精確的調(diào)節(jié)操作至關(guān)重要。本文將深入探討透射電子顯微鏡的調(diào)節(jié)方法,幫助用戶掌握如何通過(guò)細(xì)致的操作,優(yōu)化顯微鏡的性能,確保高質(zhì)量的成像結(jié)果。
1. 調(diào)節(jié)透射電子顯微鏡的基本步驟
透射電子顯微鏡的調(diào)節(jié)過(guò)程主要包括對(duì)光學(xué)系統(tǒng)、電子束、樣品臺(tái)及成像系統(tǒng)的精細(xì)調(diào)節(jié)。需要確保顯微鏡的電源、真空系統(tǒng)及冷卻系統(tǒng)工作正常,以為顯微鏡的調(diào)節(jié)和成像提供穩(wěn)定的基礎(chǔ)。之后,用戶需根據(jù)不同實(shí)驗(yàn)需求進(jìn)行以下調(diào)整。
1.1 光學(xué)系統(tǒng)的調(diào)節(jié)
光學(xué)系統(tǒng)的調(diào)節(jié)是透射電子顯微鏡使用過(guò)程中基礎(chǔ)的一步。通過(guò)調(diào)節(jié)電子槍和透鏡的焦距,確保電子束集中在樣品上,得到清晰的成像。在調(diào)節(jié)時(shí),需要注意避免電子束的散射或聚焦失真,這對(duì)后續(xù)觀察質(zhì)量影響甚大。
1.2 樣品準(zhǔn)備與臺(tái)面調(diào)節(jié)
樣品的放置位置至關(guān)重要。首先需要確保樣品處于適當(dāng)?shù)母叨群徒嵌龋ǔMㄟ^(guò)樣品臺(tái)的微調(diào)旋鈕來(lái)實(shí)現(xiàn)。此時(shí),用戶還應(yīng)確保樣品表面盡可能平整,避免因表面不平而引起的成像模糊。
1.3 掃描電流與曝光時(shí)間的調(diào)整
掃描電流和曝光時(shí)間的調(diào)整有助于提高成像的清晰度和對(duì)比度。適當(dāng)?shù)钠毓鈺r(shí)間可以避免圖像過(guò)亮或過(guò)暗,從而獲得更精細(xì)的細(xì)節(jié)。而電流過(guò)大會(huì)導(dǎo)致樣品過(guò)熱,因此在調(diào)整電流時(shí)應(yīng)謹(jǐn)慎,以保證樣品的完整性。
2. 細(xì)致調(diào)節(jié)技巧與常見(jiàn)問(wèn)題
雖然透射電子顯微鏡的操作過(guò)程較為繁瑣,但掌握一些細(xì)致的調(diào)節(jié)技巧,可以有效提升成像質(zhì)量。以下是常見(jiàn)的幾種調(diào)節(jié)技巧:
2.1 電子束的穩(wěn)定性
保持電子束的穩(wěn)定性對(duì)于獲得清晰圖像至關(guān)重要。用戶可以通過(guò)微調(diào)電子束的聚焦,確保電子束均勻分布到樣品上。定期校正電子槍,尤其是對(duì)于高分辨率成像任務(wù),可以有效防止因電流不穩(wěn)定造成的圖像失真。
2.2 灰度調(diào)節(jié)與對(duì)比度優(yōu)化
灰度調(diào)節(jié)有助于提升圖像的對(duì)比度,特別是在觀察樣品的細(xì)節(jié)時(shí)尤為重要。通過(guò)細(xì)微調(diào)整灰度級(jí)別,您可以突顯樣品的微觀結(jié)構(gòu)。而對(duì)比度的優(yōu)化,尤其是在處理不同樣品材料時(shí),可以幫助提高成像清晰度,使得微細(xì)結(jié)構(gòu)更加顯著。
3. 高級(jí)調(diào)節(jié)操作與注意事項(xiàng)
對(duì)于高級(jí)用戶來(lái)說(shuō),透射電子顯微鏡的調(diào)節(jié)不僅僅局限于基本操作,更多的是對(duì)電子束性質(zhì)、圖像處理算法等方面的調(diào)整。使用掃描透射電子顯微鏡(STEM)時(shí),必須關(guān)注圖像的襯度調(diào)節(jié)與成像模式切換。此時(shí),用戶需要深入理解不同模式下的優(yōu)缺點(diǎn),選擇適合當(dāng)前樣本和實(shí)驗(yàn)要求的設(shè)置。
4. 結(jié)語(yǔ)
透射電子顯微鏡的調(diào)節(jié)不僅依賴于理論知識(shí)的掌握,還需要實(shí)踐經(jīng)驗(yàn)的積累。通過(guò)合理的調(diào)整光學(xué)系統(tǒng)、樣品臺(tái)、掃描電流和曝光時(shí)間等多方面因素,用戶能夠有效提高成像質(zhì)量,實(shí)現(xiàn)的微觀分析。作為一項(xiàng)高度精密的科學(xué)儀器,透射電子顯微鏡的操作細(xì)節(jié)和調(diào)節(jié)技巧在不同應(yīng)用場(chǎng)景中各具挑戰(zhàn),只有通過(guò)不斷實(shí)踐,才能達(dá)到佳的顯微成像效果。
- 透射電子顯微鏡怎么聚焦
透射電子顯微鏡怎么聚焦:深入解析聚焦原理與操作技巧
透射電子顯微鏡(TEM)作為一種高分辨率的科學(xué)研究工具,廣泛應(yīng)用于材料學(xué)、生命科學(xué)及納米技術(shù)等領(lǐng)域。其關(guān)鍵技術(shù)之一就是聚焦,決定了顯微鏡成像的清晰度與準(zhǔn)確性。在本文中,我們將深入探討透射電子顯微鏡的聚焦原理、常見(jiàn)的聚焦方法及操作技巧,幫助用戶更好地掌握這一精密設(shè)備,提升顯微鏡的使用效果和圖像質(zhì)量。
透射電子顯微鏡聚焦的原理
透射電子顯微鏡的工作原理依賴于電子束與樣品相互作用,進(jìn)而產(chǎn)生放大圖像。聚焦的核心目標(biāo)是通過(guò)電子透鏡系統(tǒng)將電子束精確地集中到樣品的特定區(qū)域,從而獲得清晰的圖像。顯微鏡中電子束的聚焦過(guò)程與光學(xué)顯微鏡有所不同,因?yàn)殡娮拥牟ㄩL(zhǎng)比可見(jiàn)光波長(zhǎng)短,能夠提供更高的分辨率。
透射電子顯微鏡的聚焦方法
- 粗聚焦與精細(xì)聚焦
在使用透射電子顯微鏡時(shí),首先進(jìn)行粗聚焦。這是通過(guò)調(diào)整顯微鏡中的粗調(diào)焦輪來(lái)實(shí)現(xiàn)的,通常用于將樣品大致放置在視野內(nèi)。之后,通過(guò)精細(xì)調(diào)焦調(diào)整電子束,使圖像更加清晰,精確控制焦距,以獲取佳的圖像細(xì)節(jié)。
- 電子束調(diào)整
為了確保聚焦效果,操作人員需要根據(jù)樣品的厚度和類(lèi)型適時(shí)調(diào)整電子束的強(qiáng)度和聚焦位置。過(guò)強(qiáng)的電子束可能導(dǎo)致樣品損傷或圖像失真,而過(guò)弱的電子束則可能影響圖像質(zhì)量。
- 離焦與焦距調(diào)節(jié)
通過(guò)對(duì)透射電子顯微鏡的離焦控制,可以優(yōu)化圖像的清晰度。離焦是指電子束未能準(zhǔn)確聚焦到樣品表面,通常表現(xiàn)為圖像模糊。通過(guò)調(diào)節(jié)焦距并適當(dāng)調(diào)整顯微鏡的透鏡系統(tǒng),可以有效避免這一問(wèn)題,確保成像清晰。
- 自動(dòng)聚焦技術(shù)
許多現(xiàn)代透射電子顯微鏡配備了自動(dòng)聚焦系統(tǒng),該系統(tǒng)能夠自動(dòng)檢測(cè)和調(diào)整焦距,以確保成像的穩(wěn)定性。雖然自動(dòng)聚焦系統(tǒng)提高了操作的便捷性,但仍需在復(fù)雜樣品或高分辨率成像時(shí)手動(dòng)微調(diào),以獲得理想的效果。
影響聚焦效果的因素
- 樣品的厚度與形態(tài)
樣品的厚度直接影響電子束的穿透深度,從而影響焦點(diǎn)的準(zhǔn)確性。較厚的樣品需要較強(qiáng)的聚焦,而薄樣品則相對(duì)容易聚焦。樣品的形態(tài)和材質(zhì)特性也會(huì)對(duì)聚焦效果產(chǎn)生影響,需要根據(jù)實(shí)際情況調(diào)整聚焦策略。
- 顯微鏡的光學(xué)系統(tǒng)
顯微鏡的光學(xué)系統(tǒng),包括電子槍、透鏡以及其他組件,都會(huì)影響聚焦效果。老化的組件或損壞的鏡頭可能導(dǎo)致聚焦困難,影響圖像質(zhì)量。因此,定期的顯微鏡維護(hù)和校準(zhǔn)是確保其正常工作的關(guān)鍵。
- 操作技巧與經(jīng)驗(yàn)
透射電子顯微鏡的操作不僅僅是一個(gè)簡(jiǎn)單的物理調(diào)整過(guò)程,操作人員的經(jīng)驗(yàn)和技巧同樣至關(guān)重要。熟練的操作員可以更好地掌握不同類(lèi)型樣品的聚焦要求,避免因操作不當(dāng)導(dǎo)致的圖像失真。
結(jié)語(yǔ)
透射電子顯微鏡的聚焦技術(shù)是顯微鏡成像的基礎(chǔ),直接關(guān)系到圖像質(zhì)量與分析結(jié)果的準(zhǔn)確性。從粗聚焦到精細(xì)調(diào)焦,再到自動(dòng)聚焦系統(tǒng)的應(yīng)用,每個(gè)環(huán)節(jié)都需要操作人員細(xì)致入微的調(diào)整和操作。了解并掌握這些聚焦技巧,對(duì)于提升研究質(zhì)量、減少誤差具有重要意義。對(duì)于任何進(jìn)行透射電子顯微鏡研究的專業(yè)人員而言,熟練掌握這些操作無(wú)疑是科研成功的關(guān)鍵。
- 透射電子顯微鏡怎么校準(zhǔn)
透射電子顯微鏡(TEM)作為一種高分辨率的顯微分析工具,在科學(xué)研究和工業(yè)應(yīng)用中占據(jù)著重要地位。要獲得準(zhǔn)確的觀察結(jié)果,確保顯微鏡的精確度和穩(wěn)定性是至關(guān)重要的,這就需要進(jìn)行正確的校準(zhǔn)。本文將深入探討透射電子顯微鏡的校準(zhǔn)方法,包括其必要性、常見(jiàn)步驟以及如何確保測(cè)量精度,以幫助使用者有效地提高TEM的操作性能和圖像質(zhì)量。
透射電子顯微鏡的校準(zhǔn)主要包括電子束的對(duì)準(zhǔn)、透鏡系統(tǒng)的調(diào)節(jié)以及影像的標(biāo)定等幾個(gè)方面。這些校準(zhǔn)操作不僅有助于保證成像的清晰度,還能優(yōu)化顯微鏡的整體性能,從而提高其分辨率和精確度。在進(jìn)行校準(zhǔn)時(shí),首先需要對(duì)顯微鏡的各個(gè)部件進(jìn)行全面檢查,確保它們處于正常狀態(tài)。通過(guò)校準(zhǔn)標(biāo)準(zhǔn)樣品(如金屬膜、納米顆粒等)進(jìn)行影像對(duì)比,逐步調(diào)整各個(gè)參數(shù),以獲得佳的成像效果。
透射電子顯微鏡校準(zhǔn)的具體步驟
-
電子束的對(duì)準(zhǔn) 電子束的穩(wěn)定性直接影響圖像質(zhì)量,因此,首先要檢查并調(diào)整電子束的直線性??梢酝ㄟ^(guò)調(diào)節(jié)電子槍和光闌來(lái)確保電子束的均勻性,以減少因電子束偏移導(dǎo)致的成像誤差。
-
鏡頭系統(tǒng)的校準(zhǔn) TEM的鏡頭系統(tǒng)包括物鏡、聚焦透鏡和目標(biāo)透鏡等。每個(gè)透鏡系統(tǒng)的精確調(diào)節(jié)對(duì)于獲取高分辨率圖像至關(guān)重要。需要校正物鏡的焦距,以確保樣品在電子束照射下的聚焦效果良好。接著,通過(guò)調(diào)整其他透鏡組件,優(yōu)化顯微鏡的成像質(zhì)量。
-
圖像放大倍數(shù)的標(biāo)定 圖像放大倍數(shù)標(biāo)定是另一個(gè)關(guān)鍵步驟。通過(guò)使用已知尺寸的標(biāo)準(zhǔn)樣品,可以校準(zhǔn)圖像的實(shí)際放大倍數(shù),確保觀察到的微觀結(jié)構(gòu)與實(shí)際尺寸一致。這對(duì)于精確測(cè)量樣品特性和進(jìn)行定量分析是必要的。
-
分辨率和像差校準(zhǔn) 高分辨率是TEM的核心優(yōu)勢(shì)之一。進(jìn)行分辨率校準(zhǔn)時(shí),通常使用標(biāo)準(zhǔn)的分辨率測(cè)試樣品,以驗(yàn)證顯微鏡的實(shí)際分辨率是否符合技術(shù)參數(shù)。要檢查并調(diào)整像差,以消除成像中的畸變現(xiàn)象。
-
穩(wěn)定性和長(zhǎng)期校準(zhǔn) 為了確保透射電子顯微鏡在長(zhǎng)期使用中的穩(wěn)定性,還需要進(jìn)行定期的校準(zhǔn)檢查。這包括對(duì)電子槍的性能檢查、系統(tǒng)溫度的監(jiān)控以及顯微鏡內(nèi)部電路的維護(hù),確保在長(zhǎng)期實(shí)驗(yàn)中能夠保持一致的高性能輸出。
校準(zhǔn)的重要性
透射電子顯微鏡的準(zhǔn)確校準(zhǔn)不僅有助于提升顯微成像質(zhì)量,還能確保實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)的可靠性和重復(fù)性。在進(jìn)行高精度分析時(shí),任何微小的誤差都會(huì)影響到測(cè)量結(jié)果,導(dǎo)致錯(cuò)誤的結(jié)論。因此,定期對(duì)顯微鏡進(jìn)行校準(zhǔn),對(duì)于確保實(shí)驗(yàn)成果的科學(xué)性和可信度至關(guān)重要。
透射電子顯微鏡的校準(zhǔn)是確保高精度、高分辨率成像的基礎(chǔ)。通過(guò)科學(xué)、系統(tǒng)的校準(zhǔn)步驟,可以顯著提升顯微鏡的操作性能,保障實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)的準(zhǔn)確性。為了維持顯微鏡的長(zhǎng)期優(yōu)良狀態(tài),定期的校準(zhǔn)和維護(hù)工作不可忽視。
-
- 透射電子顯微鏡怎么成像
透射電子顯微鏡(Transmission Electron Microscope, TEM)作為現(xiàn)代科學(xué)研究中的一項(xiàng)重要工具,廣泛應(yīng)用于材料科學(xué)、生物學(xué)、化學(xué)等領(lǐng)域。它的工作原理和成像技術(shù)為我們揭示了物質(zhì)的微觀結(jié)構(gòu),尤其是能夠深入到納米級(jí)別,觀察細(xì)胞內(nèi)部的精細(xì)結(jié)構(gòu)以及各類(lèi)材料的晶體結(jié)構(gòu)。本文將詳細(xì)介紹透射電子顯微鏡如何進(jìn)行成像,探討其成像原理、過(guò)程及其優(yōu)勢(shì),為理解其在科研中的重要作用提供清晰的視角。
透射電子顯微鏡的成像原理
透射電子顯微鏡通過(guò)利用電子束與樣品的相互作用進(jìn)行成像。與傳統(tǒng)光學(xué)顯微鏡不同,透射電子顯微鏡使用高能電子束而非光線,因?yàn)殡娮硬ㄩL(zhǎng)遠(yuǎn)小于可見(jiàn)光,從而能夠觀察到比光學(xué)顯微鏡更為細(xì)微的物質(zhì)結(jié)構(gòu)。當(dāng)電子束通過(guò)樣品時(shí),部分電子被樣品中的原子散射或透過(guò),另一部分則未受影響。通過(guò)檢測(cè)這些不同的電子束,電子顯微鏡能夠繪制出樣品的詳細(xì)影像。
成像過(guò)程
-
電子束的生成與聚焦 透射電子顯微鏡的電子束通常由一個(gè)加速器產(chǎn)生并通過(guò)電磁透鏡聚焦成極細(xì)的電子束。加速后的電子束具有極高的能量,可以穿透很薄的樣品。
-
樣品的制備 樣品必須足夠薄,以便電子束能夠透過(guò)。一般來(lái)說(shuō),樣品的厚度需要控制在100nm以下,這樣電子才能順利通過(guò)并獲得清晰的成像。
-
與樣品的相互作用 當(dāng)電子束與樣品的原子發(fā)生相互作用時(shí),部分電子會(huì)被散射,部分則通過(guò)樣品。這些散射電子和透過(guò)電子的不同程度為成像提供了信息。
-
成像與放大 整個(gè)透射過(guò)程通過(guò)一系列的透鏡系統(tǒng),將透過(guò)樣品的電子聚焦到熒光屏或相機(jī)上,從而形成樣品的高分辨率圖像。不同的電子透過(guò)樣品的路徑、散射程度以及強(qiáng)度變化構(gòu)成了圖像的細(xì)節(jié)。
透射電子顯微鏡的優(yōu)勢(shì)
-
高分辨率 透射電子顯微鏡的大優(yōu)勢(shì)在于其超高的分辨率,能夠觀察到原子級(jí)別的細(xì)節(jié)。由于電子的波長(zhǎng)比可見(jiàn)光波長(zhǎng)短,它能揭示光學(xué)顯微鏡無(wú)法捕捉到的微觀結(jié)構(gòu)。
-
納米尺度觀察 TEM不僅能夠看到納米尺度的細(xì)節(jié),還是觀察材料、細(xì)胞、病毒等微觀結(jié)構(gòu)的首選工具,廣泛應(yīng)用于科學(xué)研究及臨床診斷中。
-
多功能性 除了成像,透射電子顯微鏡還可以進(jìn)行化學(xué)成分分析(如電子能量損失譜、X射線能譜等),進(jìn)一步提高了其應(yīng)用的廣泛性和準(zhǔn)確性。
結(jié)語(yǔ)
透射電子顯微鏡作為現(xiàn)代科研不可或缺的工具,其高分辨率和獨(dú)特的成像原理使其在微觀結(jié)構(gòu)觀察中具有無(wú)可替代的地位。無(wú)論是在材料科學(xué)還是生物學(xué)領(lǐng)域,TEM為我們提供了觀察微觀世界的新視角和深度,使我們得以深入探索細(xì)胞、材料和納米結(jié)構(gòu)的復(fù)雜性。
-
- 透射電子顯微鏡怎么表征
透射電子顯微鏡(Transmission Electron Microscope,簡(jiǎn)稱TEM)作為一種強(qiáng)有力的科學(xué)研究工具,廣泛應(yīng)用于材料科學(xué)、生命科學(xué)等領(lǐng)域,用于研究樣品的微觀結(jié)構(gòu)、組成和形態(tài)。透射電子顯微鏡通過(guò)利用電子束穿透樣品并形成高分辨率的圖像,從而揭示出樣品的內(nèi)部結(jié)構(gòu),具有比光學(xué)顯微鏡更為的分辨率。在這篇文章中,我們將詳細(xì)探討透射電子顯微鏡的表征原理,分析其在材料分析和生物樣品觀察中的實(shí)際應(yīng)用,并介紹其如何幫助研究人員更地解析樣品的微觀特征。
透射電子顯微鏡的工作原理
透射電子顯微鏡的基本工作原理是利用電子束的短波長(zhǎng),突破光學(xué)顯微鏡的分辨率極限。電子束被加速到高能狀態(tài),通過(guò)電磁透鏡聚焦,經(jīng)過(guò)樣品后,穿透的電子會(huì)與樣品中的原子相互作用,產(chǎn)生不同的信號(hào),如衍射圖樣、透射電子圖像等。通過(guò)探測(cè)這些信號(hào),科學(xué)家可以從不同角度觀察樣品的微觀結(jié)構(gòu)。
在TEM的工作過(guò)程中,樣品必須薄至幾個(gè)納米級(jí)別,這樣電子束才能有效穿透。這一特性使得TEM特別適合用于觀察薄膜、納米材料及生物組織切片等結(jié)構(gòu)。
透射電子顯微鏡在材料科學(xué)中的應(yīng)用
透射電子顯微鏡在材料科學(xué)領(lǐng)域的應(yīng)用尤為廣泛。它能夠幫助研究人員了解金屬、陶瓷、半導(dǎo)體等材料的晶體結(jié)構(gòu)、缺陷及表面形態(tài)。通過(guò)TEM,研究人員可以直接觀察到材料中的晶粒、位錯(cuò)、析出相等微觀結(jié)構(gòu)特征。這些信息對(duì)于提升材料的性能,尤其是在微電子學(xué)和納米技術(shù)中的應(yīng)用,具有極大的指導(dǎo)意義。
例如,在研究金屬材料的力學(xué)性能時(shí),TEM可以用來(lái)揭示材料內(nèi)部的晶體缺陷和裂紋傳播路徑,這為材料的改性和應(yīng)用提供了重要依據(jù)。
透射電子顯微鏡在生物科學(xué)中的應(yīng)用
除了材料科學(xué),透射電子顯微鏡在生物科學(xué)中的應(yīng)用也極其重要。通過(guò)TEM,生物學(xué)家可以觀察到細(xì)胞內(nèi)部的結(jié)構(gòu),如細(xì)胞膜、核膜、內(nèi)質(zhì)網(wǎng)、線粒體等,甚至可以識(shí)別細(xì)胞中的細(xì)胞器和病毒顆粒。TEM在病毒學(xué)研究中發(fā)揮著不可替代的作用,科學(xué)家可以通過(guò)透射電子顯微鏡分析病毒的形態(tài)、尺寸和結(jié)構(gòu),為病毒的診斷與提供理論基礎(chǔ)。
透射電子顯微鏡還廣泛用于分子生物學(xué)研究,幫助解析蛋白質(zhì)、核酸等生物大分子的結(jié)構(gòu),為基因工程和藥物研發(fā)提供了有力的技術(shù)支持。
透射電子顯微鏡表征的優(yōu)勢(shì)與挑戰(zhàn)
透射電子顯微鏡具備高分辨率和深度分析能力,使其在表征微觀結(jié)構(gòu)時(shí)具有無(wú)可比擬的優(yōu)勢(shì)。TEM也面臨一些挑戰(zhàn)。例如,樣品的制備要求極高,需要將樣品切割至納米級(jí)厚度,且在電子束照射下,樣品可能會(huì)受到損傷。TEM設(shè)備通常體積龐大,操作和維護(hù)要求較高,這也限制了其在一些低成本研究中的應(yīng)用。
結(jié)語(yǔ)
透射電子顯微鏡作為一種高端科學(xué)研究工具,在微觀結(jié)構(gòu)表征中發(fā)揮著至關(guān)重要的作用。無(wú)論是材料科學(xué)的創(chuàng)新研究,還是生命科學(xué)的深入探索,TEM都為科學(xué)家提供了的觀測(cè)手段。隨著技術(shù)的不斷進(jìn)步,透射電子顯微鏡的應(yīng)用前景將更加廣闊,推動(dòng)著各學(xué)科領(lǐng)域的不斷發(fā)展和創(chuàng)新。
- 紅外光譜儀對(duì)樣品有哪些要求?
- 紅外光譜儀對(duì)樣品有哪些要求?
- 振動(dòng)試驗(yàn)樣品的安裝,固定要求有哪些
- 紅外光譜儀對(duì)樣品有哪些要求?為什么要有這些要求?
- 紅外光譜儀對(duì)樣品有哪些要求?為什么要有這些要求
- 透射電子顯微鏡屬于YL器械嗎
- 透射電子顯微鏡為什么在真空下工作
- 掃描電子顯微鏡與透射電子顯微鏡成像原理有什么不同?
- 掃描電子顯微鏡與透射電子顯微鏡成像原理有何不同
- 求助:流式細(xì)胞儀的樣品前處理的注意要求有哪些
- 怎么制作顯微鏡???
- 怎么制作顯微鏡?具體過(guò)程... 怎么制作顯微鏡?具體過(guò)程 展開(kāi)
6月突出貢獻(xiàn)榜
推薦主頁(yè)
最新話題
參與評(píng)論
登錄后參與評(píng)論