探針法支原體污染實時定量PCR試劑盒

Probe-quantitative Real-time PCR Kit for Mycoplasma Contamination

貨號:Myco-qt-20     規格:20次反應

貨號:Myco-qt-50     規格:50次反應

貨號:Myco-qt-100    規格:100次反應

儲存：-20度，避光保存，有效期一年。避免反復凍融。

試劑盒特點：

1，  對柔膜菌綱（包括支原體、螺原體和無膽甾原體）有極強的特異性，與柔膜菌綱以外的其他基因組無交叉反應。可檢出歐洲藥典要求的所有支原體種類。

2，  靈敏度高，ZD可檢出反應液中2-86個基因組。

3，  使用熱啟動DNA聚合酶，可抑inhibit制非特異性擴增，降低背景熒光。

4，  帶有陽性對照樣品（組分C），可用于檢驗試劑盒有效性。

5，  帶有UDG酶，可降低殘留污染。

支原體（Mycoplasma）是一種直徑約為0.1-0.3 μm、無細胞壁的原核生物，屬于柔膜菌綱(Mollicutes)，常被用作柔膜菌綱的統稱。支原體具有變形能力，可透過常見過濾膜（0.22-0.45 μm），因此常規的無菌過濾方法不能將其去除，靶向細胞壁的抗生素也對其無效。由于在光學顯微鏡下無法判斷，細胞培養中的支原體污染是一個令人煩惱的問題。支原體種類繁多，目前已知的污染細胞的支原體有20多種，一般是由試劑和人工操作帶入，95%的污染事件是由常見的五種支原體引起；由原代細胞的原始組織帶入而形成的污染也有發生，污染的支原體種類分布較為廣泛。根據細胞類型、來源和培養方法的不同，文獻報道的細胞污染率在15-80%之間，極大影響了下游實驗的進行，因此必須使用專門的方法檢測這些污染。

傳統的培養法操作比較繁瑣，需要很長時間（最長需要28天），受操作人員的實驗技能影響比較大，并且有些支原體種類不能體外培養。而PCR法可有效克服上述缺點。本試劑盒采用探針法對細胞污染進行PCR檢測，使用通用性探針和引物，可識別超過150種支原體。常見的污染類型，如:豬鼻支原體（Mycoplasma hyorhinis）、唾液支原體（Mycoplasma salivarium）、口腔支原體（Mycoplasma orale）、精氨酸支原體（Mycoplasma arginini）、萊氏無膽甾原體（Acholeplasma laidlawii）、發酵支原體（Mycoplasma fermentans）和肺炎支原體（Mycoplasma pneumoniae），均可以檢出。根據易感程度和與人類的密切程度，選取12種支原體進行驗證，靈敏度最高可達到每反應2個基因組，大部分種類靈敏度分布在每反應2-12個基因組，ZD的是解脲脲原體，靈敏度為每反應86個基因組。本試劑盒適用于檢測歐洲藥典要求的所有支原體種類，大部分種類可以達到歐洲藥典要求的10 CFU/ml的靈敏度，考慮到支原體培養條件和菌株活性的差異，少數種類的支原體難以判斷是否符合這個要求。

試劑盒包含熱啟動DNA聚合酶、dNTP（以dUTP代替dTTP）、引物、探針、陽性對照品。探針在5`-端以FAM修飾，3`-端以MGB修飾。引物具有柔膜菌/支原體特異性，與真核生物無交叉反應，即使與親緣關系較近的革蘭氏陽性菌，如：丙酮丁醇梭菌（Clostridium acetobutylicum）、嗜酸乳桿菌（Lactobacillus acidophilus）和肺炎鏈球菌（Streptococcus pneumoniae），也無交叉反應。DNA聚合酶源自極端嗜熱菌（Thermus thermophilus），經改造后較普通的Taq酶具有更強的抗抑inhibit制能力和熱穩定性。通過結合特異性單克隆抗體，在室溫下DNA聚合酶活性被抑inhibit制。在PCR循環的熱變性階段，抗體受熱被去除，此時DNA聚合酶活性恢復，因此獲得“熱啟動”功能。熱啟動可減少殘余DNA的污染，提高PCR擴增效率、靈敏度和目的片段產量。

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