「Citrine重新定義質譜臨檢」文獻綜述之維生素D代謝物

來源：SCIEX（愛博才思）分類：科技文獻

2024-05-31 18:00:08 840閱讀次數

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2023年的型號為Citrine Triple Quad System 的液相色譜串聯質譜檢測系統（簡稱為Citrine系統）在國內獲批上市（注冊證號：國械注進20232220176）。

雖然Citrine系統上市時間不長，但由于Citrine系統的質譜主機與之前早已上市的RUO產品6500+的結構一致，眾多國內外的專家學者基于6500+開展了大量的臨床探索工作，甚至已經在國內外刊物上發表了文章或進行了會議報告。

我們將把這些文章及工作進行匯總，陸續分享在公眾號系列推文中，供更多的專家同道參考，希望能啟發更多的思路，推動做出更多成果，真正讓質譜檢驗服務于臨床。

本期分享：維生素D及相關代謝物檢測

維生素D是人體必需的一種脂溶性維生素，需轉化為有生理功能的代謝物才能作用于身體機能。活性維生素D有25羥基維生素D、1,25雙羥基維生素D及24,25雙羥基維生素D 。維生素D經肝臟代謝為25羥基維生素D[25(OH)D2和25(OH)D3] ，再由腎臟代謝為1,25-雙羥基維生素D [1,25(OH)2D] 或24,25-雙羥基維生素D [24,25(OH)2D] （如圖1所示）。所有的維生素D代謝物都可以在C3位形成差向異構體。

圖1. 維生素D人體內代謝途徑示意

NO 1: 維生素D

臨床意義：

維生素D有兩種存在形式維生素D3和維生素D2。皮膚中的7-脫氫膽甾醇受到光照后，轉化成維生素D3，另有一小部分維生素D3可通過食用動物性食品而直接攝入。維生素D2不能由機體自主合成，但可通過對一些植物性或菌類食物的攝取來補充。維生素D是一種營養素，在體內主要存在形式為25羥基維生素D，所有直接檢測維生素D并不能很好的反映人的真實狀態。

NO 2: 游離25羥基維生素D

臨床意義：

血清中25(OH)D有三種存在形式，與維生素D結合蛋白結合，與白蛋白結合及游離狀態。研究發現，游離的25(OH)D可能是評估維生素D水平更好的指標，游離25OHD與骨骼健康的相關性優于總25(OH)D。但游離狀態的VD僅占總VD的不到0.03%，含量非常低。

檢測難點:

由于游離25(OH)D在體內含量極低，檢測時還需分離C3位的差向異構體，對檢測方法的靈敏度要求高。

游離25(OH)D檢測前沿進展:

北京協和醫院檢驗科于2020年發表的文章顯示，基于 6500+質譜系統建立的快速檢測血清中24,25(OH)2D2, 24,25(OH)2D3, 25(OH)D2, 和 25(OH)D3水平的LC-MS/MS方法，能夠有效分離非活性的C3差向異構體。實驗者對老年人樣本進行統計學分析，比較了游離25(OH)D與總25(OH)D在肝、腎功能的相關性，在特殊人群中游離25(OH)D是維生素D營養狀況的可靠標志，比如肝硬化患者（文獻4）。

NO 3: 1,25雙羥基維生素D

臨床意義：

1,25(OH)2D在體內受到多重因子的嚴格調控。不過也會存在一些疾病擾亂維生素D 代謝產生1,25(OH)2D，致使1,25(OH)2D的濃度超出正常范圍。如1α羥化酶缺乏癥。所以檢測1，25(OH)2D也能判定這些疾病。

檢測難點:

血清中1,25(OH)2D含量很低（通常在15~60pg/mL）且受甲狀旁腺激素、鈣和磷調節的影響。免疫分析方法不能區分1,25(OH)2D2和1,25(OH)2D3，容易受到異構體、維生素D結合蛋白的影響。傳統的LC-MS/MS方法需要繁瑣的樣品前處理程序，如免疫親和萃取、固相萃取或衍生化等。(文獻2、3)

1,25雙羥基維生素D檢測前沿進展:

北京協和醫院檢驗科于2016年發表的文章顯示，基于 6500+質譜系統上建立的快速檢測血清中1,25(OH)2D2和1,25(OH)2D3水平的LC-MS/MS方法，檢測2174例樣本后發現1,25(OH)2D2和25(OH)D2檢出率很低，這很可能是免疫法檢測有差異的原因之一。（文獻1）

圖2. (a)空白血清中1,25(OH)2D2(左圖)，1,25(OH)2D3(中圖)和1,25(OH)2D3-d3(右圖)的色譜圖，(b)空白血清中添加10pg/mL 1,25(OH)2D2和1,25(OH)2D3 (c)臨床樣品

悉尼大學澳新軍團研究所于2021年發表的文章顯示，基于 6500 QTRAP質譜系統上建立的13種維生素D的檢測方法，較高的1,25(OH)2D3濃度與增加的骨轉換和較差的骨骼健康有關。在腎小球疾病患者中，1,25(OH)2D3與腎功能下降有關，而25(OH)D沒有差異。

NO 4: 24,25雙羥基維生素D

臨床意義：

有研究表明，25(OH) D/24,25(OH)2D比值是維生素D分解代謝的明確標志物，稱為維生素D代謝比率(VMR)，該比值的升高可作為預測維生素D的補充效果，還可用來鑒別CYP24A1突變繼發性高鈣血癥患者，如特發性嬰兒高鈣血癥等。

檢測難點:

目前尚無免疫學方法檢測。24,25(OH)2D在血清中濃度較低，且23,25(OH)2D和4,25(OH)2D對其存在干擾較難分離，對于LC-MS/MS方法檢測有很大挑戰。

24,25雙羥基維生素D檢測前沿進展:

北京協和醫院檢驗科在2022年發表的文章顯示，基于 6500+質譜平臺建立的快速簡便的液相色譜串聯質譜法測定人血清中維生素D及其代謝物，該方法能夠分離C3位的差向異構體、23R,25(OH)2D2和4β,25(OH)2D。(文獻5)

比利時的列日大學臨床化學系和巴黎的奈克爾醫院兒童疾病開發實驗室在2017年發表的文章顯示，基于QTRAP 6500質譜平臺建立的快速檢測25(OH)D、24,25(OH)2D的LC-MS/MS方法，發現VMR的檢測對特殊人群維生素D缺乏癥的評估有重要意義，比如血液透析患者的VMR非常低，同時也證明了VMR對于預測CYP24A1突變引起的高鈣很有意義。（文獻6）

圖3. 維生素D相關代謝物檢測色譜圖

總結

維生素D的25(OH)VD檢測最為普遍，但其他的多個代謝物在不同的疾病中也有臨床意義，其檢測難度也是之前關注少的原因。我們非常高興質譜能協助完成這些之前看來不可能完成的任務。希望簡單、快速、可重復和高靈敏度的質譜精準定量檢測技術，能助力行業解決更多的維生素D及其代謝物的臨床檢測需求，真正讓質譜改變每個人的生活！

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