生物實(shí)驗(yàn)室里的生命之網(wǎng)：HUVEC血管形成實(shí)驗(yàn) | 上海富衡
HUVEC細(xì)胞，全稱為Human Umbilical Vein Endothelial Cells，即人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞。這是一種來自人體臍帶的干細(xì)胞，也是臍靜脈的重要構(gòu)成細(xì)胞之一。
HUVEC細(xì)胞在醫(yī)學(xué)和生物學(xué)研究領(lǐng)域具有廣泛應(yīng)用。作為血管內(nèi)皮細(xì)胞的重要代表，它不僅是血液與組織之間的屏障，還參與調(diào)控血管功能、維持血液流動和防止血栓形成等關(guān)鍵生理過程。由于其易于獲取、增殖潛能強(qiáng)且功能穩(wěn)定，HUVEC細(xì)胞已成為實(shí)驗(yàn)室研究血管內(nèi)皮細(xì)胞功能和疾病機(jī)制的首選模型。
然而，需要注意的是，不同來源的HUVEC細(xì)胞可能存在個體差異，影響實(shí)驗(yàn)結(jié)果的重復(fù)性。原代HUVEC細(xì)胞在體外培養(yǎng)中傳代次數(shù)有限，容易老化，且對培養(yǎng)條件要求較高，需要精細(xì)控制以確保細(xì)胞正常生長。目前市面上的永生化HUVEC細(xì)胞一般也是有限傳代細(xì)胞，需關(guān)注細(xì)胞傳代次數(shù)和細(xì)胞狀態(tài)。
HUVEC成管實(shí)驗(yàn)是一種體外血管生成測定法，基于內(nèi)皮細(xì)胞在生長因子減少的基底膜提取物凝膠上培養(yǎng)時形成三維毛細(xì)管狀管狀結(jié)構(gòu)的能力。
內(nèi)皮細(xì)胞保留了分裂和快速遷移的能力，可響應(yīng)血管生成信號?；|(zhì)膠能很好地模擬機(jī)體環(huán)境，使得內(nèi)皮細(xì)胞在體外可以進(jìn)行成管實(shí)驗(yàn)。
細(xì)胞：永生化人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞（HUVEC） 富衡細(xì)胞庫自主建系，經(jīng)STR鑒定！
基質(zhì)膠：富衡實(shí)驗(yàn)室試用了多款基質(zhì)膠，為避免爭議，本文暫不做推薦，可以私信咨詢。
培養(yǎng)基：HUVEC基礎(chǔ)培養(yǎng)基、HUVEC完全培養(yǎng)基等。
耗材：細(xì)胞培養(yǎng)箱、帶數(shù)碼相機(jī)的倒置顯微鏡、12孔板、離心機(jī)、細(xì)胞計(jì)數(shù)器、移液管或槍頭等。
細(xì)胞準(zhǔn)備：選用HUVEC細(xì)胞，培養(yǎng)到匯合度80%左右。然后進(jìn)行饑餓處理，將完全培養(yǎng)基換成不含胎牛血清的HUVEC基礎(chǔ)培養(yǎng)基，培養(yǎng)16-24小時。
基質(zhì)膠準(zhǔn)備：從冰箱中取出基質(zhì)膠，放入4℃冰箱中過夜解凍。同時預(yù)冷移液管或槍頭。使用預(yù)冷的移液管或槍頭混合基質(zhì)膠至均勻狀態(tài)。用HUVEC基礎(chǔ)培養(yǎng)基稀釋基質(zhì)膠，一般稀釋比例為1:1，使最終濃度在10mg/mL左右。
鋪膠：將稀釋后的基質(zhì)膠加入孔板中，每孔加入200μL基質(zhì)膠。然后將孔板轉(zhuǎn)移到4℃冰箱中，在平整狀態(tài)下孵育過夜，使基底膜形成凝膠。第二天使用前，提前置于37℃使基質(zhì)膠固化。
細(xì)胞接種：對饑餓處理后達(dá)到80%融合的HUVEC細(xì)胞進(jìn)行消化、離心、計(jì)數(shù)；調(diào)整細(xì)胞濃度為5×105/mL，每孔接種500μL的細(xì)胞懸液到鋪有基質(zhì)膠的孔板中。
培養(yǎng)觀察：將孔板置于37℃、5%CO2條件的培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。拍攝細(xì)胞生長視頻，或者在不同時間點(diǎn)拍照，觀察血管網(wǎng)絡(luò)形成情況。一般3-12小時可見血管網(wǎng)絡(luò)形成，成管時間與細(xì)胞狀態(tài)密切相關(guān)。
HUVEC成管效果
加基質(zhì)膠時一定要慢，可以垂直或稍傾斜加入，避免產(chǎn)生氣泡。
拍攝圖片時要避免暗角，盡量拍攝清晰明亮的圖片，方便后續(xù)分析。
在實(shí)驗(yàn)過程中要注意無菌操作，避免污染。
使用的試劑和材料要提前預(yù)冷，確保實(shí)驗(yàn)溫度的一致性。
不同品牌、批次的基質(zhì)膠濃度都可能有所差異，使用前建議進(jìn)行稀釋比例的探索和優(yōu)化。
通過以上步驟，可以成功進(jìn)行HUVEC成管實(shí)驗(yàn)，觀察并研究血管生成的過程和機(jī)制。
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