免疫細胞（immune cell）俗稱白細胞，包括淋巴細胞和各種吞噬細胞等，也特指能識別抗原、產生特異性免疫應答的淋巴細胞等。淋巴細胞是免疫系統的基本成分，在體內分布很廣泛。除淋巴細胞外，參與免疫應答的細胞還有漿細胞、粒細胞、肥大細胞、抗原呈遞細胞及單核吞噬細胞系統的細胞。

免疫細胞分離方法：

1.根據細胞屬性（如粘附）和功能不同進行細胞分離：粘附分離法、尼龍毛柱分離法、羰基鐵分離法等。

2.根據細胞的大小及比重的差異進行細胞分離：葡聚糖-泛影葡胺密度梯度離心法和Percoll 不連續密度梯度離心法等。

3.利用細胞表面標志進行細胞分離：E 花環沉淀分離技術、免疫磁珠法分離、流式細胞術分離法、補體細胞毒分離法，洗淘分離法（panning）。

其中外周血單個核細胞的分離和免疫磁珠分離細胞是最常見的免疫細胞分離方法。

外周血單個核細胞的分離

原理

外周血單個核細胞（Peripheral blood mononuclear cell,PBMC）的分離是免疫學研究中的一項基本技術。目前國內外分離 PBMC 的常用方法是葡聚糖-泛影葡胺密度梯度離心法。用此方法分離 PBMC 純度可達95％，淋巴細胞約占 90％，其中 T 淋巴細胞占 80％，B 淋巴細胞占 4～10％。下圖紅色方框內即為PBMC。

方法

注意事項

1.實驗所用玻璃器皿應該潔凈。如果制備的單個核細胞懸液用于細胞培養時，上述操作過程都要在無菌條件下進行，所用器材、試劑都應為無菌。

2.實驗中的細胞得率與室溫及分層液比重等有關。分層液應避光 4℃保存。

3.不同屬的PBMC所需的分離液都不同，在分離人 PBMC 時，要求其比重為 1.077；分離小鼠單個核細胞時比重為 1.080；分離大鼠單個核細胞時比重為 1.084～1.087；分離馬單個核細胞時比重為 1.090。

4.往淋巴細胞分層液中加入稀釋全血時，不得將血液沖入分離液中，須保持兩層液體的清晰界面。

免疫磁珠法分離淋巴細胞

原理

免疫磁珠法分離細胞是基于細胞表面抗原能與連接有磁珠的特異性單抗相結合，在外加磁場中，通過抗體與磁珠相連的細胞被吸附而滯留在磁場中，無該種表面抗原的細胞由于不能與連接著磁珠的特異性單抗結合而沒有磁性，不在磁場中停留，從而使細胞得以分離。免疫磁珠法分離細胞可分為直接法和間接法。

方法

根據磁珠結合的細胞與所要獲得的細胞的關系，免疫磁珠法分離細胞可分為正選法和負選法。正選法即磁珠結合的細胞就是所要分離獲得的細胞，負選法即磁珠結合不需要的細胞，游離于上清液的細胞為所需細胞。還有一種基于負選法的高效分離方法，即在實驗體系中加入連接有磁珠的多種單抗，通過磁性分離器后，則所有不需要的細胞被吸附在磁架上，未被吸附的細胞為目的細胞。這種方法可一次去除多種細胞，又稱雞尾酒法（cocktail）。

特點

1.純度高：所獲細胞純度達（93%-99%）。

2.得率大：獲率可達90%。

3.對細胞活影響?。夯罴毎蚀笥?5%。

4.操作簡單：不需使用離心沉淀分離技術。

5.省時且費用低：不需要昂貴儀器。

測試結果

圖1.山羊抗小鼠IgG免疫磁珠分選CD4+淋巴細胞流式檢測圖

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