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上海富衡 | 人永生化表皮細(xì)胞HaCaT

來(lái)源:上海富衡生物科技有限公司      分類:行業(yè)標(biāo)準(zhǔn) 2025-04-29 09:26:23 27閱讀次數(shù)
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一、HaCaT細(xì)胞的生物學(xué)特性

HaCaT細(xì)胞是人永生化表皮角質(zhì)形成細(xì)胞系,由德國(guó)科學(xué)家Fusenig于1989年從一名62歲男性黑色素瘤患者的病灶周圍正常皮膚組織中分離建立其核心特性包括:

  1. 永生性與遺傳特征:通過(guò)自發(fā)轉(zhuǎn)化獲得永生化能力,依賴端粒酶活性維持端粒長(zhǎng)度,并攜帶p53基因雙等位突變(紫外線誘導(dǎo)的典型特征),導(dǎo)致部分DNA損傷修復(fù)機(jī)制缺失。

  2. 形態(tài)與標(biāo)志物:呈上皮樣貼壁生長(zhǎng),表達(dá)角蛋白、角化細(xì)胞交聯(lián)外膜蛋白及中間絲相關(guān)蛋白,模擬正常表皮分化過(guò)程。

  3. 功能保留:雖無(wú)致瘤性,但保留角質(zhì)形成細(xì)胞的遷移、增殖及分泌功能,適用于皮膚屏障與炎癥反應(yīng)研究。


二、標(biāo)準(zhǔn)化培養(yǎng)體系與操作要點(diǎn)

1. 培養(yǎng)條件優(yōu)化

  • 培養(yǎng)基選擇:推薦DMEM+10%胎牛血清(FBS)+1%雙抗,或采用無(wú)血清角質(zhì)形成細(xì)胞專用培養(yǎng)基(KSFM)。

  • 傳代管理:消化時(shí)間需5-15分鐘(0.25%胰酶),傳代比例1:3~1:6,接種密度建議(2.5~4.0)×10? cells/cm2以維持增殖活性。

  • 凍存與復(fù)蘇:凍存液為90% FBS+10% DMSO,程序降溫后液氮保存;復(fù)蘇后需快速離心去除凍存保護(hù)劑。

2. 常見(jiàn)問(wèn)題與對(duì)策

  • 胞內(nèi)黑點(diǎn):約30%細(xì)胞含黑色顆粒屬正常現(xiàn)象,外部碎片可通過(guò)PBS潤(rùn)洗清除。

  • 貼壁困難:建議使用膠原包被培養(yǎng)皿,并確保培養(yǎng)基pH穩(wěn)定(7.2-7.4)。

  • 增殖遲緩:檢查血清批次活性,避免過(guò)度消化或接種密度過(guò)低。

三、HaCaT在皮膚研究中的多維應(yīng)用

1. 皮膚損傷與修復(fù)機(jī)制

  • 氧化應(yīng)激模型:HaCaT對(duì)H?O?敏感,熊果酸、硒等可通過(guò)提升SOD、CAT活性減輕氧化損傷。

  • 紫外線(UVB)防護(hù):玉竹提取物可逆轉(zhuǎn)UVB誘導(dǎo)的GSH-Px活性下降,降低MDA含量達(dá)40%。

2. 藥物與化合物評(píng)價(jià)

  • 抗炎藥物篩選:低濃度青蒿琥酯(0.5 mg/mL)抑制增殖并促進(jìn)TGF-β1分泌;他克莫司則增強(qiáng)干細(xì)胞因子(SCF)分泌。

  • 毒性評(píng)估:鄰苯二甲酸酯(DINP)通過(guò)激活NF-κB通路誘導(dǎo)IL-6等炎癥因子表達(dá),揭示環(huán)境毒素的皮膚危害。

3. 基因調(diào)控與信號(hào)通路

  • Bach1基因作用:敲低Bach1加劇H?O?或UVB誘導(dǎo)的ROS積累,而過(guò)表達(dá)則顯著降低氧化應(yīng)激水平。

  • TLR信號(hào)網(wǎng)絡(luò):TLR2/4組成性表達(dá),參與皮膚免疫應(yīng)答調(diào)控,為銀屑病等炎癥疾病提供機(jī)制線索。

四、局限性與前沿探索

1. 模型局限性

  • 代謝功能差異:相比原代角質(zhì)細(xì)胞,HaCaT的CYP酶活性較低,需結(jié)合3D類器官提升藥物代謝預(yù)測(cè)精度。

  • 批次穩(wěn)定性:長(zhǎng)期傳代可能導(dǎo)致基因表達(dá)漂移,需通過(guò)STR鑒定與代謝組學(xué)監(jiān)控。

2. 技術(shù)創(chuàng)新方向

  • 多組學(xué)整合:聯(lián)合單細(xì)胞測(cè)序與空間轉(zhuǎn)錄組解析表皮異質(zhì)性亞群。

  • 動(dòng)態(tài)共培養(yǎng)模型:與成纖維細(xì)胞、免疫細(xì)胞共構(gòu)建模擬皮膚微環(huán)境的類器官平臺(tái)。

HaCaT細(xì)胞作為皮膚研究的“黃金標(biāo)準(zhǔn)”模型,在揭示表皮穩(wěn)態(tài)、疾病機(jī)制及藥物開(kāi)發(fā)中持續(xù)發(fā)揮核心作用。隨著基因編輯與類器官技術(shù)的突破,其應(yīng)用邊界正從基礎(chǔ)研究向臨床轉(zhuǎn)化延伸,為精準(zhǔn)皮膚醫(yī)學(xué)提供新范式。


標(biāo)簽:HaCaTHaCaT細(xì)胞人永生化表皮細(xì)胞

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