上海富衡 | 小鼠胰島β細胞株；Min6細胞
Min6細胞系概述
背景與來源：
Min6細胞是小鼠胰島β細胞株，由日本科學家通過將胰島素瘤（insulinoma）細胞與轉基因小鼠（表達SV40大T抗原）雜交培育而成。該細胞保留了胰島β細胞的核心功能，包括葡萄糖刺激的胰島素分泌（GSIS），是研究2型糖尿病、胰島素分泌機制和β細胞功能的常用模型。
Min6細胞的特點
功能特性：
胰島素分泌：對葡萄糖濃度敏感（低糖基礎分泌 vs. 高糖刺激分泌），可模擬生理性胰島素釋放。
基因表達：表達β細胞標志物（如胰島素、GLUT2、葡萄糖激酶等），但長期傳代后可能逐漸喪失部分功能。
極化性：貼壁生長，但細胞間連接較弱，需注意培養(yǎng)條件對功能的影響。
局限性：
永生化影響：與原代胰島β細胞相比，Min6的胰島素分泌能力較低，且對葡萄糖的敏感性可能隨傳代次數增加而下降。
基因穩(wěn)定性：長期培養(yǎng)易出現功能異質性，需定期檢測胰島素分泌能力。
培養(yǎng)條件與實驗操作
培養(yǎng)基：
基礎培養(yǎng)基：高糖DMEM（含25 mM葡萄糖）或RPMI-1640。
添加物：15% 胎牛血清（FBS）、1% 青霉素-鏈霉素、55 μM β-巰基乙醇（保護細胞抗氧化應激）。
培養(yǎng)環(huán)境：37°C、5% CO?，濕度飽和。
傳代與凍存：
傳代比例：1:3至1:5（貼壁細胞，胰酶消化時間控制在2-3分鐘）。
凍存液：含10% DMSO的完全培養(yǎng)基，液氮長期保存。
功能驗證實驗：
葡萄糖刺激胰島素分泌（GSIS）：低糖（2.8 mM葡萄糖）預處理1小時，換高糖（16.7 mM）刺激1小時，收集上清液檢測胰島素（ELISA或放射免疫法）。
藥物干預：常用藥物如棕櫚酸（模擬脂毒性）、IL-1β（炎癥刺激）、格列本脲（K?通道抑制劑）等。
研究應用
糖尿病機制研究：
研究高糖/高脂誘導的β細胞功能障礙（如胰島素分泌受損、氧化應激、內質網應激）。
探索基因調控（如PDX1、FoxO1）對β細胞存活和功能的影響。
藥物開發(fā)：
篩選改善胰島素分泌或保護β細胞的化合物（如GLP-1類似物、SGLT2抑制劑）。
評估抗氧化劑（如N-乙酰半胱氨酸）對β細胞凋亡的抑制作用。
基因編輯與信號通路：
通過CRISPR/Cas9敲除或過表達特定基因（如IRS2、SIRT1），研究其對胰島素分泌通路（如PI3K/Akt、AMPK）的調控。
注意事項
功能維持：
使用低傳代細胞（建議P5-P25），傳代次數過多可能導致胰島素分泌能力下降。
定期檢測胰島素含量（細胞內）和分泌能力（細胞外），避免功能漂變。
實驗設計：
設置嚴格的葡萄糖濃度梯度（如2.8 mM vs. 16.7 mM），并同步檢測細胞活力（如CCK-8或Calcein-AM染色）。
與原代小鼠胰島或人體β細胞系（如EndoC-βH1）對比，驗證實驗結果的可信度。
培養(yǎng)污染風險：
Min6對支原體敏感，需定期檢測；避免與其他細胞交叉污染。
Min6細胞是研究胰島β細胞功能的經典工具，其葡萄糖響應性和遺傳可操作性為糖尿病研究提供了便利。然而，需注意其與原代細胞的差異，建議結合體內實驗（如小鼠模型）和類器官技術，以更全面解析β細胞病理機制。
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