上海富衡 | C3H小鼠骨肉瘤細(xì)胞LM8

來(lái)源：上海富衡生物科技有限公司      分類：行業(yè)標(biāo)準(zhǔn) 2025-04-25 09:10:19 34閱讀次數(shù)

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一、LM8細(xì)胞系的生物學(xué)背景與特性

1. 細(xì)胞起源與建立

LM8細(xì)胞系是一種高轉(zhuǎn)移性小鼠骨肉瘤細(xì)胞，源自C3H/He小鼠的自發(fā)性骨肉瘤模型。該細(xì)胞系通過(guò)體內(nèi)連續(xù)傳代篩選獲得，具有極強(qiáng)的侵襲和轉(zhuǎn)移能力，尤其傾向于轉(zhuǎn)移至肺部和骨骼，是研究骨肉瘤轉(zhuǎn)移機(jī)制及抗腫瘤療法的經(jīng)典模型。

2. 核心生物學(xué)特性

• 表型特征：形態(tài)學(xué)：呈梭形或多角形，貼壁生長(zhǎng)，接觸抑制性弱。增殖能力：倍增時(shí)間約18-24小時(shí)（RPMI-1640培養(yǎng)基，含10% FBS）。轉(zhuǎn)移潛能：皮下接種后4周內(nèi)可形成肺轉(zhuǎn)移灶（轉(zhuǎn)移率>80%）。

• 分子標(biāo)記：高表達(dá)骨肉瘤相關(guān)標(biāo)志物（如ALK、Runx2、MMP-9）。低表達(dá)E-cadherin，與上皮-間充質(zhì)轉(zhuǎn)化（EMT）相關(guān)。

  二、LM8細(xì)胞在腫瘤研究中的應(yīng)用

  1. 骨肉瘤轉(zhuǎn)移機(jī)制研究

  三、LM8細(xì)胞的實(shí)驗(yàn)操作指南

  1. 細(xì)胞培養(yǎng)與傳代

  2. 體內(nèi)轉(zhuǎn)移模型構(gòu)建

  3. 體外功能實(shí)驗(yàn)

  四、常見(jiàn)問(wèn)題與解決方案

  1. 細(xì)胞污染或形態(tài)異常

  2. 轉(zhuǎn)移模型重復(fù)性差

  3. 藥物實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)波動(dòng)大

• 同步化處理：血清饑餓（0.5% FBS，24小時(shí)）后同步化細(xì)胞周期。

• 陽(yáng)性對(duì)照：每組加入已知敏感藥物（如阿霉素）作為內(nèi)參。

• 細(xì)胞狀態(tài)：避免使用傳代次數(shù)>30的細(xì)胞，凍存早期代次備用。

• 接種技術(shù)：使用顯微操作儀確保脛骨注射位點(diǎn)準(zhǔn)確。

• 支原體污染：PCR檢測(cè)（引物針對(duì)16S rRNA），使用含5 μg/mL Plasmocin處理1周。

• 成纖維細(xì)胞過(guò)度生長(zhǎng)：提高傳代密度，縮短消化時(shí)間。

• Transwell侵襲實(shí)驗(yàn)：基質(zhì)膠預(yù)包Transwell小室，接種5×10? cells（無(wú)血清培養(yǎng)基），24小時(shí)后結(jié)晶紫染色計(jì)數(shù)。

• 劃痕愈合實(shí)驗(yàn)：劃痕后每6小時(shí)拍照，分析遷移率（ImageJ軟件）。

• 3D腫瘤球體培養(yǎng)：使用低吸附板培養(yǎng)，模擬腫瘤組織內(nèi)缺氧和藥物滲透阻力。

• 原位模型：麻醉小鼠后，于脛骨近端注射LM8細(xì)胞（1×10? cells/50 μL PBS）。4-6周后通過(guò)X射線或微型CT檢測(cè)骨破壞及肺轉(zhuǎn)移。

• 尾靜脈注射模型：注射2×10? cells/100 μL PBS，模擬血行轉(zhuǎn)移。3周后解剖肺組織，計(jì)數(shù)轉(zhuǎn)移結(jié)節(jié)（H&E染色驗(yàn)證）。

• 培養(yǎng)基：RPMI-1640或DMEM高糖培養(yǎng)基，添加10%胎牛血清（FBS）、1%青霉素-鏈霉素。

• 傳代步驟：棄舊培養(yǎng)基，PBS輕柔洗滌2次。加入0.25%胰酶-EDTA（含0.05%膠原酶，提高消化效率），37℃孵育3-5分鐘。終止消化后離心（1,000×g，5分鐘），重懸接種至新培養(yǎng)瓶（推薦密度：1×10? cells/cm2）。

• 凍存與復(fù)蘇：凍存液：90% FBS + 10% DMSO，密度1×10? cells/mL。復(fù)蘇后存活率>90%，需24小時(shí)貼壁恢復(fù)。

• 轉(zhuǎn)移相關(guān)信號(hào)通路：PI3K/AKT/mTOR通路：調(diào)控細(xì)胞存活與侵襲。Wnt/β-catenin通路：促進(jìn)EMT和轉(zhuǎn)移定植。

• 基因編輯研究：通過(guò)CRISPR/Cas9敲除MMP-2/MMP-9，驗(yàn)證其在細(xì)胞外基質(zhì)降解中的作用。過(guò)表達(dá)miR-34a可抑制LM8細(xì)胞的肺轉(zhuǎn)移能力。

• 2. 抗腫瘤藥物篩選與療效評(píng)價(jià)

• 化療藥物測(cè)試：對(duì)阿霉素（Doxorubicin）敏感（IC50約0.5 μM）。順鉑（Cisplatin）耐藥性較高，需聯(lián)合用藥（如與MEK抑制劑聯(lián)用）。

• 靶向治療研究：抗血管生成藥物（如貝伐珠單抗）可抑制LM8原位瘤的血管密度。免疫檢查點(diǎn)抑制劑（如抗PD-1抗體）在LM8荷瘤模型中效果有限，提示其免疫“冷腫瘤”特性。

• 3. 腫瘤微環(huán)境與免疫互作

• 巨噬細(xì)胞極化：LM8細(xì)胞分泌IL-6、TGF-β，誘導(dǎo)M2型腫瘤相關(guān)巨噬細(xì)胞（TAMs）浸潤(rùn)。

• 成骨與溶骨效應(yīng)：LM8通過(guò)分泌RANKL促進(jìn)破骨細(xì)胞活化，模擬臨床骨肉瘤的骨破壞表型。

標(biāo)簽： 3H小鼠骨肉瘤細(xì)胞LM8LM8細(xì)胞

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